今天是2022年12月2日 星期五,欢迎光临本站 

血液样品

细胞样品       组织样品       血液样品       cell-free样品        RNA提取


       鉴于血液样本的不稳定性,我们建议客户在当地用新鲜样本提取 RNA。可以用于血液样本 RNA 提取的方案有Trizol 以及 QIAEN RNA Blood Mini kit 等,以上这些方法都可以提取到高质量的总 RNA。


        一、白细胞的分离

       对于大量的全血样本,需要首先分离白细胞,而后进行总 RNA 提取。

       1、在已加入抗凝剂的新鲜全血中加入等体积 PBS( 1×),充分混匀;
       2、缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中,并使上述混合液处于淋巴细胞分离液液面之上(即两种液体不要混合,保留清晰的面), 3000 g 离心 30 min;
       3、用移液枪小心分离出白细胞层;用 PBS( 1×)清洗白细胞,离心回收白细胞,弃去上清;
       4、加入白细胞 20 倍体积的 RNA Happy 或 Trizol 试剂,用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块,使之充分溶解并形成清亮不粘稠的液体;
       5、放入干冰或-80℃冰箱中可以保存半周左右。


       注意事项

        1、血液样本保存是不稳定的,新鲜血液必须立即分离出白细胞或者直接提取 RNA 进行保存;
        2、白细胞样本保存也是不稳定的,未加 Trizol 试剂保存的白细胞是非常不稳定的,白细胞样本务必按照上述过程进行保存;
        3、请在-80℃冰箱中保存 RNA 或者白细胞样本;
        4、血液样品经冻融即发生溶血,不能用于 RNA 的抽提。



       二、单个核细胞的分离

       对于大量的全血样本,如实验需要,可以首先分离单个核细胞,而后进行总 RNA 提取。


        1、在离心管中加入 3-4ml Ficoll,再缓慢沿管壁滴加全血 5ml 左右(切忌破坏界面)。
        2、室温水平离心, 2000rpm, 15 分钟。
        3、用 Tip 头小心吸取中间一层薄的呈云雾状的单个核细胞。
        4、用 PBS 或 HANKS 液或生理盐水或 1640 培养液洗涤单个核细胞溶液。
        5、室温 1000rpm 离心洗涤 10min。
        6、弃上清,再重复步骤 5 一次,合并各管。
        7、 Trizol 试剂溶裂解细胞,保存于-80℃冰箱中待抽提 RNA。



在线咨询
咨询QQ咨询QQ
咨询电话:
400-966-5216

请扫描二维码添加客服微信

公众号

[向上]